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https://hdl.handle.net/1822/26126
Título: | Adipose tissue-derived mesenchymal stem cell (AT-MSC) interaction with human-fibrin based matrices |
Autor(es): | Quigua Arroyo, Juan Andrés |
Orientador(es): | Luque, Yolanda Diebold Oliveira, M. Elisabete |
Data: | 5-Nov-2013 |
Resumo(s): | Recent studies have shown that mesenchymal stem cells (MSC) can be isolated
from adipose tissue, namely adipose tissue-derived mesenchymal stem cells (AT-MSC).
AT-MSC are described as to have the ability to differentiate into endothelial cells (EC)
and to acquire some EC functions when seeded inside of scaffolds. This potentiality
combined with fibrin-based matrices, allows the construction of complex and realistic
three-dimensional models to study in vitro the vasculogenesis and angiogenesis
processes.
Therefore, the aim of this project was to induce endothelial-like phenotype in
AT-MSC, and to determine whether or not these cells were capable to form a primary
vascular-like network when entrapped in human fibrin-based matrices (hFM). Cells
were isolated from stromal vascular fraction (SVF) of liposuctions and their
proliferative capacity analyzed when cultured in medium supplemented with either
human serum (HS) or fetal bovine serum (FBS). The proliferation analysis showed that
there were no significant differences between media and that FBS could be replaced
by HS for further studies. For the endothelial differentiation assay, AT-MSC cells were
cultured in 1) AT-MSC basal medium (AT-MSC-BM) supplemented with 10 % HS and
different vascular endothelial growth factor (VEGF) concentrations; 2) human umbilical
vein endothelial cell (HUVEC) growth basal medium (HUVEC-GBM); and 3) HUVECderived
conditioned medium (HUVEC-CM). Western blot analysis revealed that cells
did not express the specific endothelial marker CD31 in all culture conditions. For the
studies with the hFM, cells were previously cultured in the above described media for
15 days and then seeded in hFM. Cells distributed throughout matrices in all conditions
and remained viable. Haematoxylin-eosin and immunofluorescence stainings showed
that cells did not express the endothelial marker and no tubular-like structures were
identified for VEGF concentrations tested.
This study provides the basis for the study of vasculogenesis and angiogenesis
processes with potential applications for the ocular surface regeneration in
devastating inflammatory eye diseases. Estudos recentes têm demonstrado que as células estaminais mesenquimais (MSC) podem ser isoladas também do tecido adiposo (em inglês, adipose tissuederived mesenchymal stem cells, AT-MSC). Estas células são descritas como tendo a capacidade de se diferenciarem em células endoteliais. Matrizes de fibrina permitem a criação de modelos tridimensionais mais complexos e realistas para o estudo em in vitro da vasculogénese e da angiogénese. O objetivo principal deste projeto foi a indução do fenótipo endotelial nas ATMSC, e determinar se estas eram ou não capazes de formar uma rede vascular primária quando incorporadas em matrizes de fibrina humana (hFM). As AT-MSC foram isoladas a partir da fração do estroma vascular (SVF) de lipoaspirações. Inicialmente foi analisada a capacidade proliferativa destas quando cultivadas em meios suplementados com soro humano (HS) ou soro fetal bovino (FBS). Os resultados demostraram que não houve diferenças significativas entre os soros, podendo ser o FBS, substituído pelo HS nos ensaios posteriores. Para o ensaio de diferenciação endotelial, as AT-MSC foram cultivadas em diferentes meios de cultivo: 1) no seu meio basal (AT-MSC-BM), suplementado com 10 % de HS e diferentes concentrações do vascular endothelial growth factor (VEGF); 2) no meio basal usado para o crescimento das células endoteliais da veia umbilical humana (HUVEC-BGM); e 3) no meio condicionado (HUVEC-CM). A análise por western blot revelou que independentemente do meio de cultura usado, as células não expressaram o marcador endotelial CD31. Para os estudos com as hFM, as células foram previamente cultivadas nos meios supramencionados durante 15 dias e depois incorporadas nas matrizes. Colorações de hematoxilina e eosina mostraram que as células distribuíram-se ao longo das matrizes e permaneceram viáveis. A microscopia de imunofluorescência permitiu observar que as células não expressaram novamente o marcador endotelial e não foi possível identificar a formação de estruturas ou reorganização por parte das células nas condições testadas. Este estudo serve de base para futuras investigações no âmbito ocular, nomeadamente na criação de modelos de inflamação da superfície ocular. |
Tipo: | Dissertação de mestrado |
Descrição: | Dissertação de mestrado em Biofísica e Bionanossistemas |
URI: | https://hdl.handle.net/1822/26126 |
Acesso: | Acesso restrito UMinho |
Aparece nas coleções: | BUM - Dissertações de Mestrado DBio - Dissertações de Mestrado/Master Theses |
Ficheiros deste registo:
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