Comunidade bacteriana associada à filosfera da oliveira e a sua capacidade antagonista contra Pseudomonas savastanoi pv. savastanoi

Abstract

A tuberculose da oliveira é uma das doenças mais importantes do olival, pelos prejuízos económicos que pode causar derivada das perdas de produção e de qualidade dos produtos obtidos. É provocada pela bactéria Pseudomonas savastanoi pv. savastanoi (Psv), que causa a formação de nódulos nos caules e ramos, raramente afetando as folhas e os frutos. A inexistência de métodos de luta eficazes contra esta doença associado ao crescimento da agricultura biológica, tem incentivado a realização de estudos que visem a identificação de agentes de luta biológica que possam ser usados contra a tuberculose da oliveira. Este trabalho teve como objetivo isolar bactérias da filosfera da oliveira e efetuar uma seleção dos isolados com maior capacidade de inibir o crescimento de Psv. As bactérias endofiticas e epifiticas foram isoladas de folhas, caules e nódulos das cvs. "Cobrançosa" (tolerante à doença) e "Verdeal Transmontana" suscetível à doença), pela inoculação destes segmentos esterilizados ou por diluições decimais sucessivas de material não esterilizado em meio de cultura Luria-Broth (LB), respetivamente. Os isolados obtidos foram identificados por sequenciação da região 16Sdo rDNA e, a sua atividade antagonista contra Psvfoi avaliada recorrendo ao método da co-cultura em meio LB.Os valores dos raios internos (na região inter-inóculos) das colónias, foram determinados e comparados com o controlo (culturas com um inóculo de Psv). Para os isolados que demonstraram uma evidente ação antagonista, foram ainda avaliados os mecanismos a ela associados em condições in vitro, nomeadamente a produção de enzimas líticas, compostos voláteis e de sideróforos, utilizando métodos qualitativos. A análise de escala multidimensional não métrica (NMDS) associada à análise de similaridade ANOSIM mostrou que a composição da comunidade bacteriana endofitica e epifitica diferiu entre cultivares e órgão vegetal amostrado, apresentando os caules o maior número de espécies exclusivas pertencentes aos géneros Agrococcus e Frondihabitans. Dos 60 isolados testados, cerca de 20% exibiram capacidade para inibir o crescimento de Psv em mais de 50% face ao controlo. De uma maneira geral, as espécies isoladas de caules e nódulos da cv. Cobrançosa apresentaram uma maior capacidade antagonista (mais de 20%) face aos isolados obtidos da cv. Verdeal Transmontana, tanto ao nível da comunidade endofitica como epifitica. A produção de enzimas líticas, em especial de proteases, bem como de sideroforos e de compostos voláteis pelos isolados bacterianos testados, pareceu estar envolvida no mecanismo antagonista contra Psv. Os resultados sugerem que a cultivar e o tipo de órgão vegetal tem influência no processo de colonização das bactérias na oliveira. A menor susceptibilidade da cv. "Cobrançosa" à tuberculose parece estar relacionada com a presença de bactérias endofiticas e epifiticas na filosfera, em especial de antagonistas. O efeito destes microrganismos tem de ser confirmado em ensaios in planta em trabalhos futuros.